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Título :	MODELO 3D DE CULTIVO CELULAR DE ESFEROIDES COMO HERRAMIENTA DE EVALUACION Y METODO PRACTICO ALTERNATIVO PARA LA ENSE�ANZA
Autor :	RAVICHANDRAN MANISEKARAN
Fecha de publicación :	2022
URI :	https://www.innovacioneducativa.unam.mx:8443/jspui/handle/123456789/8148
metadata.dc.contributor.responsible:	RAVICHANDRAN MANISEKARAN
metadata.dcterms.callforproject:	2022
metadata.dc.coverage.temporal:	2022-2023
metadata.dcterms.educationLevel:	Licenciatura
metadata.dcterms.educationLevel.SEP:	nivel superior
metadata.dc.description.objective:	Objetivo general: a) Dise�ar un protocolo para el cultivo y caracterizaci�n de modelo celular 3D utilizando l�neas celulares cancerosas como parte de la ense�anza-aprendizaje de las asignaturas: Biolog�a Celular I & II y Biolog�a Molecular I & II, Inmunolog�a y procesos bioqu�micos relacionados para estudiantes de la Licenciatura, Especialidad, Maestr�a y Doctorado en Odontolog�a y Ciencias Agrogen�micas. b) Elaborar un manual de pr�cticas de laboratorio y art�culo de divulgaci�n con protocolos estandarizados y reproducibles para el subcultivo, cultivo y caracterizaci�n de c�lulas esferoides 3D, que pueda ser utilizado para la ense�anza-aprendizaje, diversas l�neas de investigaci�n de proyectos de ciencias b�sicas. c) Informar y difundir el manual a estudiantes, profesores y otras universidades del pa�s sobre la importancia del uso de un modelo de cultivo celular en 3D para la implementaci�n de tecnolog�a moderna en diversas aplicaciones biom�dicas. d) Adem�s, proporcione formaci�n b�sica a los alumnos. Objetivos especificos: Prioridad 1 Cultivo de una l�nea celular de c�ncer de mama basado en un protocolo est�ndar para producir esferoides de monocultivo Prioridad: 2 Elegir una cantidad adecuada de c�lulas para un mayor crecimiento de esferoides. Prioridad: 3 Los esferoides se desarrollar�n utilizando placas de fondo redondo de 96 pocillos. Se determinar� el crecimiento y la fijaci�n ultrabaja. Prioridad: 4 Durante un per�odo de 1 a 7 d�as, se estudiar� el tama�o y la formaci�n de esferoides mediante microscopio confocal. Prioridad: 5 Finalmente, se elegir� el tama�o de esferoide apropiado que alcance un di�metro de ? 300 ?m. Prioridad: 6 El m�todo descrito anteriormente se replicar� para garantizar que el protocolo optimizado se pueda reproducir con las mismas condiciones. Prioridad: 7 Inicio de la elaboraci�n del manual de protocolo para la ENES Prioridad: 8 Brindar una formaci�n b�sica a estudiantes de pregrado, posgrado y profesores y tambi�n explicar la importancia de los modelos de cultivo celular en 3D. Prioridad: 9 Informar y difundir el manual a estudiantes, profesores de la ENES Le�n y otras universidades. Prioridad: 10 La membrana biomim�tica encapsulada en medicamentos contra el c�ncer se incubar� con cultivo de esferoides en diferentes proporciones y estudiar la captaci�n e internalizaci�n mediante microscop�a confocal. Prioridad: 11 Finalmente, concluya el estudio evaluando la eficacia terap�utica del nanosistema biomim�tico dise�ado contra c�lulas tumorales monoesferoides y los resultados se comunicar�n al art�culo de divulgaci�n.
metadata.dc.description.strategies:	El proceso se llevar� a cabo en base a los siguientes pasos, a) Cultivo celular: La l�nea celular de c�ncer de mama humano, MDA-MB-231 se obtendr� de American Type Culture Collection (ATCC, EE. UU.). Las c�lulas se mantuvieron en medio de �guila modificado de Dulbecco (DMEM) (Sigma, EE. UU.) Suplementado con 10% (v / v) de suero bovino fetal inactivado por calor (FBS) (Sigma, EE. UU.), 100 UI / ml de penicilina y 100 ng / ml de estreptomicina (Sigma, EE. UU.). Las c�lulas se cultivaron a 37 � C en una incubadora humidificada al 90% con CO2 al 5%. b) Generaci�n y tratamiento de cultivos esferoidales de tumores multicelulares (MCTS) a partir de MDA-MB-231 basados ??en 2 metodolog�as de cultivo de superposici�n l�quida para su optimizaci�n:La generaci�n de esferoides se llev� a cabo mediante una t�cnica de cultivo de superposici�n l�quida. Para producir una condici�n no adherente para el desarrollo de cultivo MCTS, se recubri� previamente una placa de 96 pocillos con agar al 1% (p / v). Luego, se carg� en cada pocillo una suspensi�n de c�lulas individuales de MCF-7 a una densidad de 5 x 104 c�lulas en 200 �l de DMEM. La agregaci�n de c�lulas se facilit� mediante la centrifugaci�n de la placa a 1.000 xg durante 5 minutos. Luego, la placa se incub� a 37 � C en una incubadora humidificada al 90% con CO2 al 5% durante 3 d�as. Para los esferoides de monocultivo utilizados en este estudio, se sembraron las cantidades apropiadas de c�lulas en placas de fondo en U de 96 pocillos de uni�n ultrabaja (ULA) (Corning) en su medio correspondiente y se centrifugaron a 300 rpm durante 5 min. Todas las c�lulas se mantuvieron en una incubadora humidificada a 37 � C y CO2 al 5%. c) Evaluaci�n microsc�pica de luz:Las apariencias morfol�gicas de los cultivos MCTS y sus cambios estructurales despu�s de 4-7 d�as se observar�n utilizando un microscopio �ptico invertido Nikon Diaphot-TMD (Nikon, Jap�n). d) Observaci�n microsc�pica electr�nica del cultivo de esferoides:Los cultivos de MCTS se incubaron durante 4-7 d�as, se estudiar�n utilizando un protocolo est�ndar para determinar el tama�o y crecimiento de los esferoides. e) Optimizaci�n de tama�o:A partir de ambas metodolog�as, nuestra intenci�n es obtener un esferoide de tama�o uniforme de di�metro ? 300 �m. f) Ensayo de viabilidad celular MTT:El ensayo MTT para el cultivo monocapa se llevar� a cabo utilizando una t�cnica est�ndar, mientras que el ensayo para los cultivos MCTS se llev� a cabo con una ligera modificaci�n del protocolo est�ndar. g) Finalmente, en base al resultado obtenido se elaborar� el manual de protocolo y se incluir� en las normas de la ISO 9001: 2008. h) Posteriormente, para el tratamiento de f�rmacos encapsulados con membrana biomim�tica se administrar�n esferoides de 7 d�as de edad que se trasladaron a una nueva placa de 96 pocillos que se pre-recubri� con placas de agar / ULA. Cada pocillo se agregar� con diferentes concentraciones conocidas de f�rmacos y se evaluar� el efecto anticanceroso.
metadata.dc.description.goals:	Metas 1er a�o: a) Elecci�n de la l�nea celular de c�ncer de mama para el dise�o est�ndar de este modelo. b) Estandarizar los par�metros de cultivo celular para la producci�n reproducible del modelo de esferoide 3D. c) Optimice la densidad celular y el n�mero de c�lulas para determinar la producci�n de esferoides casi perfectos. d) Evaluar las condiciones de laboratorio para el modelo celular 3D para l�neas celulares cancerosas y determinar el d�a exacto de crecimiento y formaci�n del esferoide apropiado para estudios de administraci�n de f�rmacos (en los estudios futuros). e) Caracterizaci�n del esferoide 3D obtenido por microscop�a confocal. f) Elaborar el manual en base al protocolo operativo est�ndar obtenido que se incluir� en el manual de pr�cticas de laboratorio "Dise�o y caracterizaci�n de un modelo celular esferoide 3D para probar la toxicidad y el desarrollo de f�rmacos". Formar�n parte de la Procesos de Docencia Estandarizados del Laboratorio de Investigaci�n Interdisciplinar que este en proceso de certificaci�n seg�n ISO 9001: 2008. e) La evaluaci�n de la liberaci�n de f�rmacos in vitro del estudio de f�rmacos contra el c�ncer en varios intervalos de tiempo se llevar� a cabo en colaboraci�n con la tesis de los estudiantes y se publicar� en Mundo nano.
metadata.dcterms.provenance:	Escuela Nacional de Estudios Superiores Unidad Le�n (ENES Le�n)
metadata.dc.subject.DGAPA:	Farmacolog�a y toxicolog�a
metadata.dc.type:	Proyecto PAPIME
Aparece en las colecciones:	2. Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud

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