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Título : Fortalecimiento de la Enseñanza Experimental en Inmunología Veterinaria
Autor : MONTARAZ CRESPO, JUAN ANTONIO
Fecha de publicación : 2019
Resumen : El proyecto pretende reforzar la enseñanza experimental correspondiente a la asignatura Inmunología en la carrera de Médico Veterinario Zootecnista en la FES-Cuautitlán. Actualmente se cuenta con un programa de prácticas mayoritariamente demostrativas e independientes una de otra que se desarrollan en sesiones semanales de dos horas (se anexa el calendario en pdf para el semestre 2019-1). El presente proyecto pretende desarrollar un protocolo experimental con actividades ligadas entre si realizadas por los alumnos que vayan arrojando resultados parciales que permitan hacer evidentes algunos principios básicos de la respuesta inmunitaria adaptativa y su evaluación en el laboratorio. Básicamente el protocolo consiste en purificar inmunoglobulinas de una especie (por ejemplo bovino) y utilizarlas como antígeno para producir sueros hiperinmunes en conejos. Se utilizarán técnicas de electroforesis en geles de poliacrilamida para evaluar la pureza de la preparación de inmunoglobulinas y de inmunoelectrotransferencia ("western blott") para evaluar la calidad de los antisueros. Posteriormente mediante pruebas de precipitación en agar (Outcherlony) y ELISA se establecerá el título de los antisueros. La asignatura Inmunología se imparte todos los semestres en un promedio de seis grupos por semestre y 30 alumnos por grupo. En virtud de lo anterior se propone ensayar el nuevo protocolo de prácticas con un grupo piloto que permita afinar las condiciones para poder trasladar el nuevo esquema de prácticas a todos los grupos de manera semestral.
URI : http://132.248.161.133:8080/jspui/handle/123456789/6957
metadata.dc.contributor.responsible: MONTARAZ CRESPO, JUAN ANTONIO
metadata.dc.coverage.temporal: 2019-2021
metadata.dc.description.objective: El objetivo general es que a través de una nueva propuesta para el desarrollo de la sección práctica de la asignatura Inmunología de la carrera de MVZ se consiga el financiamiento necesario para ensayarla en forma piloto en un grupo regular de la asignatura y, paralelamente, se promueva el reagrupamiento de los profesores de carrera y asignatura del aŕea en torno a este objetivo. Nota: Se anexa en archivo pdf el programa actual de prácticas de la asignatura Inmunología de la carrera de MVZ
metadata.dc.description.hypothesis: El grupo de profesores involucrados en la impartición de la asignatura Inmunología coinciden en que las sesiones prácticas (dos horas semanales) se van quedando rezagadas y se requiere un nuevo planteamiento que los aglutine en torno a un nuevo proyecto. Hay consenso en cuanto a aprovechar las oportunidades que ofrece la UNAM a través de su programa PAPIME para intentar este propósito buscando un nuevo enfoque más interactivo entre alumno y conocimiento que justifique la obtención de recursos financieros que reimpulsen el área. Adicionalmente se observa que los profesores de carrera involucrados se van acercando a la jubilación (todos son mayores de 60 años) y es necesario un relanzamiento del área que cree condiciones favorables para el desarrollo académico de profesores de asignatura jóvenes que han concluido o están por concluir sus estudios de posgrado y podrán optar por las plazas de carrera que irán quedando vacantes. En síntesis, la "apuesta" es someter al PAPIME un nuevo esquema de la sección práctica de la asignatura Inmunología en la carrera de MVZ que permita un mayor involucramiento de los alumnos en su aprendizaje (aprender haciendo) y genere el financiamiento necesario para ensayar el nuevo esquema en un grupo piloto con miras a exportarlo a los seis grupos (en promedio) que se abren cada semestre. De tener éxito con nuestra propuesta se prevee un reagrupamiento de profesores de carrera y profesores de asignatura en torno a nuevas iniciativas académicas que revitalicen el área en beneficio del alumnado y de los académico involucrados.
metadata.dc.description.strategies: En este apartado se presenta el contenido y metodología de las 13 sesiones prácticas (sesiones de dos horas semanales) incluidas en el presente proyecto. Como ya se dijo, se trabajará con un grupo piloto de 30 a 36 alumnos que se dividirá en 3 equipos de 10-12 alumnos cada uno. 1. Reglamento del Laboratorio de Inmunología y Normas de Bioseguridad. Esta es una sesión introductoria sobre el comportamiento que deben seguir los alumnos en el Laboratorio y las medidas de bioseguridad y manejo de residuos biológico-infecciosos que deberán observarse durante las sesiones prácticas. 2. Toma de muestra sanguínea y obtención de suero: Se obtendrán tres muestras sanguíneas de 20 ml c/u (usando tubos vacutainer) de la vena yugular de tres bovinos lecheros adultos (del hato de la FES-C). La muestras se dejaran reposando 2 hrs a temperatura ambiente y toda la noche a 4C para ser centrifugadas al día siguiente para la separación de los sueros que se mezclarán, alicuotarán y congelarán hasta su uso. 3. Precipitación y aislamiento de inmunoglobulinas (Igs) con sulfato de amonio: Brevemente, a un volumen de suero se le adiciona medio volumen de una solución saturada de sulfato de amonio; la mezcla se agita por 15 minutos y se centrifuga a 3500 rpm. El precipitado se disuelve en solución salina fisiológica (SSF) y se repiten los pasos anteriores para redisolver el precipitado en un tercio del volumen original del suero. La muestra de Igs se dializa en frio contra SSF durante 3 a 5 días y se establece la concentración de proteínas por el método de Bradford. 4. Análisis de la purificación de Igs mediante electroforesis en gel de SDS-Poliacrilamida (SDS-PAGE): Se correrán geles al 7.5% de poliacrilamida en condiciones reductoras de acuerdo al protocolo de Laemmli. Para visualizar las bandas (patrón de peso molecular, cadenas pesadas y ligeras) los geles se teñirán con azul de Coomasie. 5. Inmunización de animales de laboratorio (conejos) con la muestra de Igs: La idea es producir un antisuero. Se utilizará un conejo adulto por cada grupo de alumnos. Para la primer inmunización se preparara una emulsion con una parte de Igs (200 mg de proteína por conejo) y una parte de aceite mineral; la emulsión se aplicará por vía intramuscular. Previo a la inmunización se obtendrá una muestra sanguínea de los animales para obtener un suero testigo negativo. 6. Primera dosis de refuerzo a los conejos: Se le aplicará una dosis de 200mg de proteína en SSF por conejo por vía subcutánea. 7. Segunda dosis de refuerzo a los conejos: Se repite los señalado en el paso anterior. 8. Obtención del antisuero de conejo: Los tres animales se anestesiarán y exsanguinarán en blanco por punción cardiaca. Se obtendrá el suero de los animales como se describió en el inciso 2 de este protocolo. 9. y 10. Evaluación del antisuero de conejo por inmunoelectrotransferencia ("western blott"): El objetivo es evaluar el patrón de reactividad (la reacción antígeno-anticuerpo) de los antisueros frente a las inmunoglobulinas de bovino. El ensayo se realiza en dos sesiones; en la primera (sesión 9) se correra un gel de SDS-PAGE en el que se separaran las Igs como se hizo en el inciso 4 de este protocolo. Posteriormente se hará una replica del gel electrotransfiriendo las proteínas separado a una hoja de papel de nitrocelulosa (NC). La hoja de NC se mantendrá en refrigeración para ser usada la siguiente semana (sesión 10). Sobre la hoja de NC se llevará a cabo la reacción antígeno (Igs de bovino) anticuerpo (antisuero de conejo); ésta reacción se revelará con un anticonejo (comercial) marcado con peroxidasa, que a su vez se revelará con un cromógeno que producirá bandas visibles. 11. Evaluación del título del antisuero de conejo por precipitación en gel de agarosa (Ouchterlony): Se trata de estimar la concentración de anticuerpos anti-bovino en los antisueros de conejo por medio de una reacción de precipitación. Se preparan cajas Petri de 5cm de diametro con gel de agarosa ; se realizan seis perforaciones periféricas (en las que se coloca una gota de las diluciones del antisuero) y una perforación central (en la que se coloca una gota de Igs) y se observan las líneas de precipitación 1 o 2 días después. 12. Evaluación del título del antisuero de conejo por prueba de ELISA: La prueba de ELISA (ensayo inmunoenzimático) es la prueba serológica más ampliamente utilizada en el diagnóstico serológico. En este caso las Igs de bovino se adhieren a los pocillos de microplacas de fondo plano, después del bloqueo de las placas con una proteína ajena al ensayo se agregan diluciones del antisuero. La reacción Igs-Ac se revela con un antisuero anti-conejo comercial marcado con una enzima, seguido de un cromógeno que da una intensidad de color que se evalúa en un lector específico (elisometro). 13. Discusión de resultados: Los tres equipos de alumnos elaborarán un informe con sus resultados y éstos serán discutidos en compañía de los profesores involucrados en el curso.
metadata.dc.description.selfAssessment: Actualmente el área de Inmunología Veterinaria cuenta con cuatro profesores de carrera, la más joven se acaba de incorporar hace apenas unos meses; otros dos (incluyendome) hemos dedicado la mayor parte de los últimos años a laboratorios dedicados al posgrado y la investigación, alejados física y académicamente de la licenciatura de Medicina Veterinaria y Zootecnia (más allá de la impartación de los cursos de Inmunología a nivel licenciatura que nos asignan). Esto resultó en que en más de 25 años el área de Inmunología Veterinaria no fuera la sede de un proyecto PAPIME o PAPIIT, con la consecuente ausencia de fondos adicionales para su desarrollo. Adicionalmente, no obstante compartir con el área de Bacteriología Veterinaria un espacio que cuenta con dos laboratorios de docencia y una pequeña área con seis cubículos-laboratorios, ninguno de estos últimos estaba asignado a Inmunología Veterinaria. Todo esto me animó a elaborar el actual proyecto con el ánimo de reagrupar tanto a profesores de carrera como a profesores de asignatura asociados con Inmunología Veterinaria en torno a fortalecer las prácticas de laboratorio de la asignatura Inmunología, reforzar el equipamiento del área y habilitar un espacio físico para pequeños proyectos de investigación a futuro. En este sentido me siento muy satisfecho con lo logrado; no obstante no haber logrado el apoyo de las autoridades para que se nos asignara un espacio físico, conseguimos habilitar un bodega de unos 10 metros cuadrados para instalar un pequeño laboratorio, con una ventana al exterior y un par de mesas de trabajo. A consecuencia de la pandemia por covid-19, parte del proyecto no pudo ser ejecutado según lo planteado, pero pudimos canalizar los recursos para la compra de equipo de laboratorio con el que no se contaba. Puedo asegurar que la totalidad del presupuesto aprobado para los dos años, $235,307.00, se utilizó para la compra de reactivos, insumos, equipo (refrigerador, cámara de electroforesis e inmunotransferencia, balanza analítica, agitador, micropipetas) y la habilitación de una bodega en cubículo-laboratorio asignado y bajo la responsabilidad del área de Inmunología Veterinaria. Adicionalmente cuatro profesores que participamos en este proyecto y uno más invitado de la Facultad de Medicina Veterinaria Y Zootecnia impartimos un curso de actualización auspiciado por DGAPA intitulado "Inmunología Veterinaria: 1a Dosis de Refuerzo" en Enero de 2019 (un curso de este tipo y con esta temática no se había impartido en la FES-C en muchos años)
metadata.dc.description.goalsAchieved: Metas del 1er año: a) Adquisición de equipo e insumos para la realización del proyecto: Esta meta se cumplió en su totalidad conforme al presupuesto autorizado. Se adquirió un refrigerador, un equipo de electroforesis-inmunotransferencia y un juego de micropipetas. Por otra parte, se adquirieron reactivos e insumos para ensayar los procedimientos y técnicas señaladas en el proyecto. b) Adecuación de un área física específica para el desarrollo del proyecto: No hubo una respuesta adecuada a una petición hecha a las autoridades de la facultad por los involucrados en este proyecto para que se nos asignara un área, a nuestro juicio subutilizada, para realizar el proyecto. En consecuencia vaciamos una bodega de aproximadamente 10 metros cuadrados y se le abrió una ventana al exterior, se le dotó de dos mesas de trabajo y ahí instalamos la sede del proyecto. c) Registrar un programa de Servicio Social-Titulación para integrar alumnos de MVZ al proyecto: Se hizo la solicitud que recibió varias recomendaciones en cuanto a infraestructura física y de equipamiento que no pudieron ser atendidas en su momento y esto ha quedado pendiente. d) Estandarizar los procedimientos y técnicas descritas en la metodología del proyecto: Se ensayaron los procedimientos de manejo y sangrado de conejos, semipurificación de gama globulinas de bovino, separación de gama globulinas por electroforesis en SDS-poliacrilamida y electrotransferencia de gama globulinas a papel de nitrocelulosa. Metas del 2o año: La pandemia por covid-19 provocó el cierre de la facultad el 19 de marzo de 2020 y hasta la fecha nos mantenemos en la misma situación. La segunda mitad del semestre 2020-2 se concluyó a distancia incluyendo las actividades de laboratorio. Esto provocó que el proyecto se interrumpiera junto con el resto de las actividades escolares presenciales de alumnos y profesores. En consecuencia no se formó un grupo piloto para ensayar el protocolo del proyecto, ni se elaboró un manual con los procedimientos y técnicas ensayadas por alumnos. Dada esta situación se solicitó un reajuste del presupuesto 2020 que incluía $96,500 en la partida 411 (reactivos; muchos de los cuales requerían condiciones de refrigeración o congelación con fecha de caducidad) y se transfirieron $60,000 a la partida 512 (equipo) y se adquirió una balanza analítica y un agitador rotatorio reforzaron la infraestructura experimental en el área de Inmunología Veterinaria.
metadata.dcterms.provenance: F.E.S. Cuautitlán
metadata.dc.subject.DGAPA: Zootecnia, veterinaria y acuacultura
metadata.dc.type: Proyecto PAPIME
Aparece en las colecciones: 2. Área de las Ciencias Biológicas, Químicas y de la Salud

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